中國倉鼠卵巢（CHO）細(xì)胞系是*普遍的生物制藥表達(dá)系統(tǒng)，已被證明可以**地用于蛋白質(zhì)治療劑的商業(yè)生產(chǎn)。為確保重組表達(dá)的生物制藥的**性，衛(wèi)生當(dāng)局要求通過應(yīng)用具有高靈敏度和特異性的HCP檢測方法來密切監(jiān)測HCP雜質(zhì)。CHO|360-HCP ELISA 是一種增強(qiáng)型仿制藥 HCP 檢測試劑盒，由四種不同的仿制藥試劑盒組成，與單一仿制藥試劑盒相比，旨在涵蓋更廣泛的 CHO-HCP 范圍。

CHO|360-HCP ELISA 試劑盒（A 型至 D 型）基于獨(dú)特的檢測設(shè)計(jì)，采用來自兩個(gè)物種的不同制備的 HCP 抗原和抗體：

? 抗原由CHO-K1和CHO-S模擬發(fā)酵獲得的總HCP和分餾HCP制備

? 特異性抗體是通過山羊和兔子的平行免疫產(chǎn)生的

這種方法產(chǎn)生了四種不同的 HCP ELISA 試劑盒，它們共同構(gòu)成了增強(qiáng)型通用 CHO|360-HCP 檢測。

CHO|360-HCP ELISA方法在BioGenes根據(jù)相應(yīng)的ICH指南ICH Q2（R1）（“分析程序的驗(yàn)證：文本和方法”）進(jìn)行了鑒定，由于該方法作為生物測定的性質(zhì)，該方法略有偏差。

在 1D 和 2D 分析中，≥ CHO|360-HCP 抗原分布的覆蓋率證明了所有四種抗體制劑（A 至 D）的高特異性。對(duì)于每個(gè) CHO|360-HCP ELISA 試劑盒（A 至 D），在檢測工作范圍內(nèi)，在 100±30% 加標(biāo)抗原的接受標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)，估計(jì)三個(gè)加標(biāo)樣品的回收率令人滿意。CHO|360-HCP ELISA 試劑盒（A至D）的高靈敏度，由驗(yàn)證參數(shù)LOD、LOQ和工作范圍描述，如下所示：

? LOD ： 0.5 – 1.0 ng/mL

? LOQ ： 2 – 3 ng/mL

? 工作范圍：2 – 100 ng/mL

HCP 的回收率很大程度上取決于所使用的 ELISA 試劑盒的類型

為了證明這一點(diǎn)，我們在大量模擬 CHO HCP 樣品的基礎(chǔ)上測試了 CHO|360-HCP ELISA 試劑盒（A 至 D）和市售的通用 CHO HCP 檢測。在大多數(shù)情況下，與其他商業(yè)試劑盒相比，使用四種 CHO|360-HCP ELISAs 試劑盒中的一種實(shí)現(xiàn)了*佳回收率（見右圖）。

? 樣品 4：使用 ELISA 試劑盒 D 型和市售試劑盒時(shí)，ELISA 試劑盒 A、B 和 C 估計(jì)回收率為 > 90%

靈敏度較低，后者僅檢測到20%的宿主細(xì)胞蛋白。

? 由于高估，可能會(huì)出現(xiàn) 100% >回收值。

為什么BioGenes在免疫接種前應(yīng)用HCP分離？

當(dāng)然，低分子量 （LMW） 蛋白的免疫原性低于大分子蛋白，導(dǎo)致動(dòng)物免疫后抗 LMW HCP 抗體的產(chǎn)生減少。因此，ELISA或Western Blot可能無法檢測到免疫原性或非免疫原性非常弱的HCP。BioGenes'CHO|360-HCP ELISA通過使用總HCP和分餾HCP對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫接種來解決這個(gè)問題，從而產(chǎn)生了四種不同的HCP ELISA試劑盒（A到D）。

然后再次合并從免疫中獲得的抗體，每種抗體都具有三種不同的分子量組分，以將抗體反應(yīng)性結(jié)合到完整的 HCP 譜圖中。兔子和山羊的免疫接種可以生成不同的抗體組合，從而在定制樣品中更廣泛地覆蓋HCP。

BioGenes建議：

我們建議首先測試所有四種試劑盒類型（入門套件），然后根據(jù) ELISA 關(guān)鍵參數(shù)（如稀釋線性、準(zhǔn)確度和總覆蓋率）選擇性能*佳的試劑盒，用于所有后續(xù)測試。

通用 ELISA 試劑盒的生成如何

每種增強(qiáng)型通用HCP ELISA試劑盒的生產(chǎn)涉及以下步驟：

? 使用特定抗原材料對(duì)個(gè)人進(jìn)行免疫接種

? 多克隆抗體的分離和純化

? 即用型ELISA試劑盒的生產(chǎn)

每種試劑盒類型的抗體將對(duì)總蛋白質(zhì)譜的子集表現(xiàn)出特異性反應(yīng)性，并且對(duì)給定菌株/細(xì)胞系的其他蛋白質(zhì)表現(xiàn)出弱反應(yīng)性或無反應(yīng)性。與總蛋白質(zhì)相比，被識(shí)別的蛋白質(zhì)比例稱為覆蓋率。

如何選擇*合適的套件？

每個(gè)藥物制造過程都會(huì)產(chǎn)生特定的 HCP 特征。為了實(shí)現(xiàn)*佳的 HCP 監(jiān)測，應(yīng)應(yīng)用*佳擬合測試。如圖所示，與底部試劑盒相比，上部試劑盒的抗體組合覆蓋了示例性項(xiàng)目樣本中更廣泛的 HCP。因此，由于整體覆蓋率更高，上層試劑盒將是監(jiān)測 HCP 減少情況的更好選擇。為了鑒定*適合的通用 360 HCP ELISA 試劑盒，BioGenes 建議對(duì)

關(guān)鍵 HCP ELISA 性能標(biāo)準(zhǔn)

? HCP 覆蓋率

? 充分減少 HCP 對(duì)數(shù)

? ELISA準(zhǔn)確度

? 樣品稀釋線性度

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